提供者:上海威正翔禹生物科技有限公司 發布時間:2022/1/4 12:01:53 閱讀次數:144次 進入該公司店鋪
一、細胞復蘇
將凍存細2113胞從液氮5261中取出后,在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融4102化。移人15ml離心管中,加入10ml預熱1653的DMEM完quan培養基,輕輕吹勻,離心,2000rpmX2min,棄上清液。
加入10mlDMEM培養基清洗,棄上清液。加入10mlDMEM完quan培養基,輕輕吹打,接種于10cm盤中,在含5%CO2的細胞培養箱中培養。
二、細胞傳代
細胞密度達到80%~90%時.去培養基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人細胞培養箱3min。加人1mlDMEM完quan培養基終止胰酶消化,轉移至15ml離心管。
加入10mlPBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。再加入10mlPBS(經高壓滅菌,保存于40C),吹勻,吸取10微升進行計數,按照1×106/盤接種,在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。
三、細胞凍存
細胞密度達到80%~90%時,去培養基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完quan培養基終止胰酶消化,轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。
加入lml凍存液(90%血清,10%DMSO),放入凍存盒內(盒內有異丙醇,以bao證溫度降低的速度),立即放入一80℃冰箱內,過夜,第二天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放人液氮,可以保存三個月。
凍存液的配制:70%的完quan培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
科研實驗中,細胞的體外培養一直是一個重要環節。細胞要養好,就要用好血清,如Ausbian®特胎牛血清,它適合各種細胞培養,尤其適合難養細胞,如:干細胞、肝細胞,神經細胞,原代培養、細胞融合、轉染細胞等。
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