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                HK-2細胞培養常見問題攻略

                提供者:上海晶風生物科技有限公司   發布時間:2021/12/31 9:12:14  閱讀次數:258次   進入該公司店鋪

                 人腎皮質近曲小管上皮細胞系HK2,取自正常成人腎臟的永生化近端小管上皮,通過轉入HPV-16 E6/E7基因構建而成,并在無血清培養基中持續生長了一年多。HK-2的生長依賴于表皮生長因子EGF,保留了良好的PTCs的表型。

                 

                陽性表達:堿性磷酸酶;γ-谷氨酰轉肽酶;亮氨酸氨肽酶;酸性磷酸酶;細胞角蛋白; α3β1 整合素;纖連蛋白。

                 

                陰性表達:因子VIII 相關抗原、6.19 抗原和 CALLA 內肽酶呈陰性。

                 



                常見問題


                 

                在培養HK2細胞的時候,常會出現一些細節問題,不可掉以輕心。本文為大家總結培養HK2細胞常見的問題,以及解決方案。

                 

                出現空泡

                01

                 

                空泡問題需要結合生長速度和形態來看:如果生長速度和形態正常,空泡可能是正常的細胞活動,傳代后空泡即可減輕。

                 

                如果生長較慢,形態異常,空泡可能是自噬行為,可加大血清比例(不超過20%)或更換血清品牌改善細胞狀態。

                 

                HK-2細胞

                 

                出現拉絲

                02

                 

                細胞伸出細長的絲有兩種情況:

                 

                情況是HK2細胞遷移造成的,HK2細胞在培養皿上并不是靜態的,也會出現遷移。遷移時HK2細胞的一部分滯留在原處,遷移的過程中會拉出一條細長的絲。這種情況下拉絲的細胞占少數,細胞整體的生長狀態是正常的,不用特殊處理。

                 

                第二種情況是營養不良,拉絲的細胞占大多數,同時細胞生長緩慢,此時可以提高血清比例(不超過20%)或添加5 ng/mL EGF。

                 

                形態不對

                03

                 

                正常的HK2呈鋪路石狀生長,如果HK2細胞呈鐮刀狀或不規則狀(如下圖),可能是因為培養環境發生了較大的改變,比如從有血清到無血清的轉換,此時換回原來的培養條件細胞可逐漸恢復;如果細胞變得細長,這時候可能是營養不良。

                HK2細胞呈鐮刀狀或不規則狀

                 

                生長緩慢

                04

                 

                在普諾賽標準培養條件(MEM+10%FBS+1%PS),以及1:3傳代條件下,HK2細胞的傳代周期約為3天。

                 

                當細胞生長緩慢,一周無法傳代時,需要考慮培養基特別是血清是否合適。

                 

                選擇合適的培養基及血清,同時加大細胞接種密度可以改善。

                 



                培養基選擇


                 

                HK-2初建系使用無血清培養,眾多文獻以及實踐證明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下,HK2細胞也能良好生長。

                 

                胎牛血清的質量是關鍵,胎牛血清品質越高,HK-2狀態越好。

                 

                若使用無血清培養基培養,需要使用多聚賴氨酸或者明膠包被培養瓶,以促使貼壁。

                 

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